Product Description
Kunci dari kit ini adalah sistem pengikatan DNA milik kami yang memungkinkan pengikatan DNA yang dapat dibalik dengan sangat efisien ke kolom mini sementara protein dan kotoran lainnya dihilangkan dengan penyangga pencuci. Asam nukleat kemudian dielusi dengan air steril atau buffer elusi.
Kit ini dirancang untuk pemurnian DNA plasmid yang cepat dan efisien dari 1 hingga 4 mL kultur E. coli. Kolom mini memiliki kapasitas pengikatan DNA plasmid 50 µg. Hasil dari 1 mL kultur biasanya sekitar 8 sampai 12 µg. Plasmid Miniprep Kit II (PD1213), dengan kapasitas pengikatan DNA plasmid 80 µg, direkomendasikan jika menginginkan hasil yang lebih tinggi (> 50 µg).
DNA yang dimurnikan siap untuk aplikasi hilir seperti kloning / subklon, RFLP, sekuensing, dan transfeksi sel yang kuat seperti sel HEK293.
Important Notes
Nomor Salinan Plasmid: Hasil DNA plasmid tergantung pada asal replikasi dan ukuran plasmid. Protokol dioptimalkan untuk pemurnian plasmid nomor salinan tinggi. Untuk plasmid dengan jumlah salinan rendah, volume kultur dan volume buffer perlu ditingkatkan 2 kali. Silakan hubungi layanan pelanggan kami untuk informasi lebih lanjut dan referensi Tabel 1 untuk plasmid yang umum digunakan.
Tabel 1 Plasmid yang umum digunakan dan hasil yang diharapkan.
|
Plasmid |
Origin |
Copy Numbers |
Expected Yield(µg per 1 mL) |
|
pSC101 |
pSC101 |
5 |
0.1-0.2 |
|
pACYC |
P15A |
10-12 |
0.4-0.6 |
|
pSuperCos |
pMB1 |
10-20 |
0.4-1 |
|
pBR322 |
pMB1 |
15-20 |
0.6-1 |
|
pGEMR |
Muted pMB1 |
300-400 |
6-7 |
|
pBluescriptR |
ColE1 |
300-500 |
6-8 |
|
pUC |
Muted pMB1 |
500-700 |
8-12 |
Strain Inang: Strain yang digunakan untuk menyebarkan plasmid memiliki pengaruh yang signifikan terhadap hasil. Strain inang seperti Top 10 dan DH5a menghasilkan DNA plasmid berkualitas tinggi. strain endA + seperti JM101, JM110, HB101, TG1 dan turunannya, biasanya memiliki hasil plasmid yang rendah karena endonuklease endogen atau karbohidrat tinggi yang dilepaskan selama lisis. Kami merekomendasikan untuk mengubah plasmid menjadi strain akhir jika hasil tidak memuaskan. Silakan lihat Tabel 2 untuk informasi akhirA.
Table 2 endA strains of E. Coli.
|
EndA- Strains of E. Coli |
|||||||||||||
|
DH5α |
DH1 |
DH21 |
JM106 |
JM109 |
SK2267 |
SRB |
XLO |
||||||
|
TOP10 |
DH10B |
JM103 |
JM107 |
SK1590 |
MM294 |
Stbl2TM |
XL1-Blue |
||||||
|
BJ5182 |
DH20 |
JM105 |
JM108 |
SK1592 |
Select96TM |
Stbl4TM |
XL10-Gold |
||||||
|
EndA+ Strains of E. Coli |
|||||||||||||
|
C600 |
JM110 |
RR1 |
ABLE® C |
CJ236 |
KW251 |
P2392 |
BL21(DE3) |
||||||
|
HB101 |
TG1 |
TB1 |
ABLE® K |
DH12STM |
LE392 |
PR700 |
BL21(DE3)pLysS |
||||||
|
JM101 |
JM83 |
TKB1 |
HMS174 |
ES1301 |
M1061 |
Q358 |
BMH 71-18 |
||||||
|
All NM strains |
All Y strains |
||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Massa Sel Optimal (OD600 x mL Kultur): Prosedur ini dirancang untuk mengisolasi plasmid yang ditumbuhkan dalam media LB standar (Luria Bertani) selama 12-16 jam hingga kepadatan OD600 2.0 hingga 3.0. Jika media kaya seperti TB atau 2xYT digunakan, pastikan kepadatan sel tidak melebihi 3.0 (OD600). Rasio tinggi biomassa di atas buffer lisis menghasilkan hasil dan kemurnian DNA yang rendah. Kolom mini memiliki biomassa optimal 10-15. Misalnya, jika OD600 adalah 3,0, volume kultur optimal harus 1-5 mL. Untuk jumlah sel yang berlebihan, kurangi biomassa atau naikkan volume Buffer A1, B1 dan N1.
Volume Kultur: Gunakan labu atau tabung dengan volume 4 kali lebih besar dari media kultur untuk memastikan kondisi optimal untuk pertumbuhan bakteri. Jangan melebihi volume kultur maksimum yang disarankan dalam protokol. Lisis yang tidak lengkap karena jumlah kultur bakteri yang berlebihan menghasilkan hasil yang lebih rendah dan kemurnian yang lebih rendah.
Storage and Stability
Buffer A1 harus disimpan pada suhu 4 ° C setelah RNase A ditambahkan. Semua bahan lainnya dapat disimpan pada suhu kamar (22-25 ° C). Umur simpan yang dijamin adalah 12 bulan sejak tanggal pembelian.
Before Starting
Persiapkan semua komponen dan persiapkan semua bahan yang diperlukan dengan memeriksa buklet petunjuk ini dan menjadi terbiasa dengan setiap langkah dan memberi perhatian khusus pada yang berikut,
Important
- RNase A: 20 mg / mL. Ini stabil selama lebih dari setengah tahun bila disimpan pada suhu kamar. Putar vial RNase A sebentar. Tambahkan solusi RNase A ke Buffer A1 dan aduk rata sebelum digunakan. Simpan pada suhu 4 ° C.
- Tambahkan 8 mL (PD1211-00) atau 60 mL (PD1211-01) atau 96 mL (PD1211-02) atau 60 mL (PD1211-03) etanol 96-100% ke setiap botol DNA Wash Buffer sebelum digunakan.
- Penyangga B1 mengendap di bawah suhu kamar. Sangat penting untuk memanaskan buffer pada 50 ° C untuk melarutkan endapan sebelum digunakan.
- Tutup rapat untuk Buffer B1 setelah digunakan.
- Pastikan tersedianya centrifuge berkemampuan 13.000 rpm.
- Lakukan semua sentrifugasi pada suhu kamar.
Materials supplied by user
- High speed microcentrifuge or Vacuum manifold.
- 96-100% ethanol.
- 1.5 mL microcentrifuge tubes
MORE INFO :
——————————————
Website : www.bmdstore.com
No Kantor : 021-2943 2095
No HP : 0813 1754 7882
Email : [email protected]
