Product Description
Plasmid Midi Kit I
Buffer A1, B1, C1, KB, Elution Buffer, RNase A, ezBindTM Columns (10), User Manual(1)
Introduction
Kunci dari kit ini adalah sistem pengikatan DNA milik kami yang memungkinkan DNA mengikat secara eksklusif dan efisien ke matriks ezBindTM kami sementara protein dan kotoran lainnya dihilangkan dengan penyangga pencuci. Asam nukleat mudah dielusi dengan air steril atau Elution Buffer. Tidak seperti kit lain di pasaran, kit pemurnian plasmid kami yang dipatenkan tidak memiliki garam chaotropik di buffer, DNA yang dimurnikan adalah bebas residu resin penukar guanidin / anion yang memungkinkan kinerja tinggi aplikasi hilir. Kit ini dirancang untuk pemurnian DNA plasmid yang cepat dan efisien dari 15 hingga 50 mL kultur E. coli. Kolom midi memiliki kapasitas pengikatan DNA plasmid 250 µg. Hasil dari 50 mL kultur biasanya sekitar 150 hingga 250 µg. DNA yang dimurnikan siap untuk kinerja tinggi aplikasi hilir seperti transfeksi sel kuat seperti HEK293, pemetaan restriksi, skrining perpustakaan, sekuensing, serta terapi gen dan vaksinasi genetik.
Important Notes
Nomor Salinan Plasmid: Hasil DNA plasmid tergantung pada asal replikasi dan ukuran plasmid. Protokol dioptimalkan untuk pemurnian plasmid nomor salinan tinggi. Untuk plasmid dengan jumlah salinan rendah, volume kultur dan volume buffer perlu ditingkatkan 2 kali. Silakan hubungi layanan pelanggan kami untuk informasi lebih lanjut dan referensi Tabel1 untuk plasmid yang umum digunakan.
Table 1 Commonly used plasmid and expected yield.
| Plasmid | Origin | Copy Numbers |
Expected Yield(µg per 50 mL) |
| pSC101 | pSC101 |
5 |
5 |
| pACYC | P15A |
10-12 |
5-10 |
| pSuperCos | pMB1 |
10-20 |
10-20 |
| pBR322 | pMB1 |
15-20 |
10-20 |
| pGEMR | Muted pMB1 |
300-400 |
100-150 |
| pBluescriptR | ColE1 |
300-500 |
100-200 |
| pUC | Muted pMB1 |
500-700 |
150-250 |
Strain Inang: Strain yang digunakan untuk menyebarkan plasmid memiliki pengaruh yang signifikan terhadap hasil. Strain inang seperti Top 10 dan DH5a menghasilkan DNA plasmid berkualitas tinggi. strain endA + seperti JM101, JM110, HB101, TG1 dan turunannya, biasanya memiliki hasil plasmid yang rendah karena endonuklease endogen atau karbohidrat tinggi yang dilepaskan selama lisis. Kami merekomendasikan untuk mengubah plasmid menjadi strain akhir jika hasil tidak memuaskan. Untuk memurnikan DNA plasmid dari strain endA + (Tabel 2), kami merekomendasikan menggunakan produk PD1712.
Table2 endA strains of E. Coli.
| EndA- Strains of E. Coli | ||||||||||||||
| DH5α | DH1 | DH21 | JM106 | JM109 | SK2267 | SRB | XLO | |||||||
| TOP10 | DH10B | JM103 | JM107 | SK1590 | MM294 | Stbl2TM | XL1-Blue | |||||||
| BJ5182 | DH20 | JM105 | JM108 | SK1592 | Select96TM | Stbl4TM | XL10-Gold | |||||||
| EndA+ Strains of E. Coli | ||||||||||||||
| C600 | JM110 | RR1 | ABLE® C | CJ236 | KW251 | P2392 | BL21(DE3) | |||||||
| HB101 | TG1 | TB1 | ABLE® K | DH12STM | LE392 | PR700 | BL21(DE3)pLysS | |||||||
| JM101 | JM83 | TKB1 | HMS174 | ES1301 | M1061 | Q358 | BMH 71-18 | |||||||
| All NM strains | All Y strains | |||||||||||||
Massa Sel Optimal (OD600 x mL Kultur): Prosedur ini dirancang untuk mengisolasi plasmid yang ditumbuhkan dalam media LB standar (Luria Bertani) selama 12 -16 jam dengan kepadatan OD600 2.0 hingga 3.0. Jika media kaya seperti TB atau 2xYT digunakan, pastikan kepadatan sel tidak melebihi 3.0 (OD600). Rasio tinggi biomassa di atas buffer lisis menghasilkan hasil dan kemurnian DNA yang rendah. Kolom midi memiliki biomassa optimal 100-150. Misalnya, jika OD600 adalah 3,0, volume kultur optimal harus 25-50 mL. Volume Kultur: Gunakan labu atau tabung dengan volume 4 kali lebih besar dari media kultur untuk memastikan kondisi optimal untuk pertumbuhan bakteri. Jangan melebihi volume kultur maksimum yang disarankan dalam protokol. Lisis yang tidak lengkap karena jumlah kultur bakteri yang berlebihan menghasilkan hasil yang lebih rendah dan kemurnian yang lebih rendah.
Storage and Stability
Buffer A1 harus disimpan pada suhu 4 ° C setelah RNase A ditambahkan. Semua bahan lainnya dapat disimpan pada suhu kamar (22-25 ° C). Umur simpan yang dijamin adalah 12 bulan sejak tanggal pembelian.
Before Starting
Persiapkan semua komponen dan persiapkan semua bahan yang diperlukan dengan memeriksa buklet instruksi ini dan menjadi terbiasa dengan setiap langkah. Penting RNase A: Stabil selama lebih dari setengah tahun bila disimpan pada suhu kamar. Putar botol RNase A sebentar. Tambahkan solusi RNase A ke Buffer A1 dan aduk rata sebelum digunakan. Simpan pada suhu 4 ° C. Buffer B1 mengendap di bawah suhu kamar. Sangat penting untuk memanaskan buffer pada 50 ° C untuk melarutkan endapan sebelum digunakan. Tutup rapat untuk Buffer B1 setelah digunakan. Pastikan ketersediaan centrifuge, terlebih setelah mencampurkan lisat dengan ethanol, sampel perlu segera diolah baik dengan cara sentrifugasi. Lakukan semua sentrifugasi pada suhu kamar.
Materials supplied by users
- 70% ethanol and 100% ethanol.
- High speed centrifuge.
- 30 mL high speed centrifuge tubes.
- 15 mL and 50 mL conical tubes.
- 1.5 mL tubes.
- Isopropanol if precipitate the plasmid DNA.
MORE INFO :
——————————————
Website : www.bmdstore.com
No Kantor : 021-2943 2095
No HP : 0813 1754 7882
Email : [email protected]
