Plasmid Maxi Kit 25 preps PD1511-02

Product Description

Buffer A1, B1, C1, Elution Buffer, RNase A, Maxi columns (flat bottom) (2), User Manual(1)

Introduction

Kunci kit ini adalah sistem pengikatan DNA milik kami yang memungkinkan pengikatan DNA yang sangat efisien ke matriks ezBindTM kami sementara protein dan kotoran lainnya dihilangkan dengan penyangga pencuci. Asam nukleat mudah dielusi dengan air steril atau Elution Buffer. Tidak seperti kit lain di pasaran, kit pemurnian plasmid kami yang telah dipatenkan tidak memiliki garam chaotropic di buffernya. DNA yang dimurnikan adalah bebas residu resin penukar guanidin / anion. Kit ini dirancang untuk pemurnian DNA plasmid yang cepat dan efisien dari 100 hingga 250 mL kultur E. coli. Kolom maxi memiliki kapasitas pengikatan DNA plasmid 1 mg. DNA plasmid yang dimurnikan siap untuk aplikasi hilir seperti transfeksi sel kuat seperti HEK293, pemetaan restriksi, skrining perpustakaan, sekuensing, serta terapi gen dan vaksinasi genetik.

Important Notes

Nomor Salinan Plasmid: Hasil DNA plasmid tergantung pada asal replikasi dan ukuran plasmid. Protokol dioptimalkan untuk pemurnian plasmid nomor salinan tinggi. Untuk plasmid dengan jumlah salinan rendah, volume kultur dan volume buffer perlu ditingkatkan 2 hingga 3 kali. Tabel Referensi 1 untuk plasmid yang umum digunakan,

Table 1 Commonly used plasmids.

Plasmid	Origin	Copy Numbers	Expected Yield(µg per 200 mL)
PSC101	pSC101	5	12
pACYC	P15A	10-12	25-40
pSuperCos	pMB1	10-20	30-50
PBR322	pMB1	15-20	35-50
pGEM^R	Muted pMB1	300-400	350-450
pBluescript^R	ColE1	300-500	450-600
PUC	Muted pMB1	500-700	700-1,000

Strain Inang: Strain yang digunakan untuk menyebarkan plasmid memiliki pengaruh yang signifikan terhadap hasil. Strain inang seperti Top 10 dan DH5a menghasilkan DNA plasmid berkualitas tinggi. strain endA + seperti JM101, JM110, HB101, TG1 dan turunannya, biasanya memiliki hasil plasmid yang rendah karena endonuklease endogen atau karbohidrat tinggi yang dilepaskan selama lisis. Kami merekomendasikan untuk mengubah plasmid menjadi strain akhir jika hasil tidak memuaskan. Untuk memurnikan DNA plasmid dari strain endA + (Tabel 2), kami merekomendasikan menggunakan produk PD1713.

Table2 endA+ strains of E. Coli.

EndA- Strains of E. Coli
DH5α	DH1	DH21	JM106	JM109	SK2267	SRB	XLO
TOP10	DH10B	JM103	JM107	SK1590	MM294	Stbl2^TM	XL1-Blue
BJ5182	DH20	JM105	JM108	SK1592	Select96^TM	Stbl4^TM	XL10-Gold

EndA+ Strains of E. Coli
C600	JM110	RR1	ABLE^® C	CJ236	KW251	P2392	BL21(DE3)
HB101	TG1	TB1	ABLE^® K	DH12S^TM	LE392	PR700	BL21(DE3)pLysS
JM101	JM83	TKB1	HMS174	ES1301	M1061	Q358	BMH 71-18
All NM strains				All Y strains

Massa Sel Optimal (OD600 x mL Kultur): Prosedur ini dirancang untuk mengisolasi plasmid yang ditumbuhkan dalam media LB standar (Luria Bertani) selama 12 -16 jam dengan kepadatan OD600 2.0 hingga 3.0. Jika media kaya seperti TB atau 2xYT digunakan, pastikan kepadatan sel tidak melebihi 3.0 (OD600). Rasio tinggi biomassa di atas buffer lisis menghasilkan hasil dan kemurnian DNA yang rendah. Kolom maxi memiliki biomassa optimal 450-550. Misalnya, jika OD600 adalah 2,5, volume kultur optimal harus 200 mL. Volume Kultur: Gunakan labu atau tabung dengan volume 4 kali lebih besar dari media kultur untuk memastikan kondisi optimal untuk pertumbuhan bakteri. Jangan melebihi volume kultur maksimum yang disarankan dalam protokol. Lisis yang tidak lengkap karena jumlah kultur bakteri yang berlebihan menghasilkan hasil yang lebih rendah dan kemurnian yang lebih rendah.

Storage and Stability

Buffer A1 harus disimpan pada suhu 4 ° C setelah RNase A ditambahkan. Semua bahan lainnya dapat disimpan pada suhu kamar (22-25 ° C). Umur simpan yang dijamin adalah 12 bulan sejak tanggal pembelian.

Before Starting

Persiapkan semua komponen dan persiapkan semua bahan yang diperlukan dengan memeriksa buklet instruksi ini dan menjadi terbiasa dengan setiap langkah.

Important

RNase A: Stabil selama lebih dari setengah tahun bila disimpan pada suhu kamar. Putar botol RNase A sebentar. Tambahkan larutan RNase A ke Buffer A1 dan aduk rata sebelum digunakan, lalu simpan pada suhu 4oC.
Buffer B1 mengendap di bawah suhu kamar. Sangat penting untuk memanaskan buffer pada 50oC untuk melarutkan endapan sebelum digunakan.
Menginkubasi Buffer C1 pada suhu 4 oC sebelum dilakukan percobaan akan menurunkan endapan mengambang.
Tutup rapat untuk Buffer B1 setelah digunakan.
Pastikan ketersediaan centrifuge dan vacuum manifold, terutama setelah mencampurkan lisat dengan ethanol maka sampel perlu segera diolah baik dengan cara sentrifugasi maupun vakum.
Lakukan semua sentrifugasi pada suhu ruangan.

Materials supplied by users

70% ethanol and 100% ethanol
High speed centrifuge
30 mL high speed centrifuge tubes
50 mL tubes

Kit contents

Catalog#	PD1511-00	PD1511-01	PD1511-02
Preps	2	10	25
ezBind^TM Columns	2	10	25
Buffer A1	22 mL	110 mL	270 mL
Buffer B1	22 mL	110 mL	270 mL
Buffer C1	27 mL	135 mL	330 mL
RNase A(20 mg/mL)	2.2 mg(110 µL)	11 mg(550 µL)	27 mg(1.35 µL)
Elution Buffer	6 mL	30 mL	60 mL
User Manual	1	1	1

Safety Information

Buffer C1 mengandung asam asam, pakai sarung tangan dan kacamata pelindung saat menangani.
Buffer C1 mengandung garam chaotropic, yang dapat membentuk senyawa reaktif jika digabungkan dengan pemutih. Jangan menambahkan pemutih atau larutan asam langsung ke limbah persiapan.

Operating Protocol