Product Description

Penyangga F1, Penyangga F2, Penyangga F3, Penyangga Pencucian DNA, Penyangga KB, Penyangga Elusi, Kolom Pembersihan Lisat, Kolom Mini dan RNase A

1. Panen 1-2 mL kultur bakteri segar dengan sentrifugasi selama 1 menit pada 10.000 rpm. Tuang supernatan dan tepuk-tepuk tabung terbalik di atas tisu untuk menghilangkan media residu. Hapus media residu sepenuhnya. 2. 2. Tambahkan 200 µL Buffer F1 dan resuspensi pelet bakteri sepenuhnya dengan vortexing atau pipetting (Resuspensi lengkap sangat penting untuk hasil yang optimal).

3. Tambahkan 200 µL Buffer F2, campur dengan pembalik 10 kali (jangan vortex) dan inkubasi pada suhu kamar selama 2 menit hingga larutan menjadi jernih.

4. Tambahkan 200 µL Buffer F3 ke sampel dari langkah 3, aduk rata dengan membalik vial sebanyak 10 kali. Inkubasi pada suhu kamar selama 2-3 menit. Pindahkan seluruh lisat ke kolom pembersihan lisat.

5. Centrifuge pada 12.000 rpm selama 30 detik. Catatan: Jika lisat masih tertinggal di kolom, putar lagi selama 30 detik.

6. Buang kolom pembersihan lisat dan tambahkan 200 µL 100% etanol ke dalam tabung pengumpul, aduk rata dengan pipet dan pindahkan sampel ke kolom mini DNA.

7. Putar dengan kecepatan 12.000 rm selama 30 detik. Buang aliran melalui dan gunakan tabung pengumpul

8. Opsional: Tambahkan 300 µL Buffer KB dan sentrifugasi pada 12.000 rpm selama 30 detik. Buang aliran-melalui dan kembalikan kolom ke tabung pengumpul. Catatan: Langkah ini TIDAK diperlukan jika plasmid sedang dimurnikan dari strain endA seperti DH5a dan Top 10. Pencucian Buffer KB diperlukan untuk strain endA + seperti HB101, JM110, JM 101 dan strain turunannya.

9. Tambahkan 600 µL DNA Wash Buffer (Tambahkan etanol ke buffer pencuci DNA sebelum digunakan) ke dalam spin kolom, sentrifugasi pada 12.000 rpm (14.000 – 18.000 x g) selama 30 detik pada RT. Lepaskan kolom putar dari tabung dan buang aliran-melalui.

10. Masukkan kembali kolom putar ke dalam tabung pengumpul dan sentrifugasi selama 1 menit pada 13.000 rpm. Catatan: Etanol sisa akan dihilangkan lebih efektif dengan tutup kolom terbuka.

11. Dengan hati-hati pindahkan spin column ke dalam Elution tube (Disediakan) dan tambahkan Elution Buffer 50-100 µL ke dalam kolom dan diamkan selama 1 menit. Elusi DNA dengan sentrifugasi pada 12.000 rpm (14.000-18.000 x g) selama 30 detik untuk mengelusi DNA.

Catatan: Elusi pertama biasanya menghasilkan sekitar 70% DNA plasmid yang terikat ke kolom. Tambahkan DNA yang dielusi kembali ke kolom untuk elusi lain menghasilkan 20-30% DNA yang terikat ke kolom.

MORE INFO :
——————————————
Website       : www.bmdstore.com
No Kantor   : 021-2943 2095
No HP          : 0813 1754 7882
Email           : [email protected]