Express Endofree Plasmid Maxiprep 10 Preps PD2568-01

Product Description

Express Endofree Plasmid Maxiprep

pengantar

Kunci kit ini adalah sistem pengikatan DNA milik kami yang memungkinkan pengikatan DNA yang sangat efisien ke matriks ezBindTM kami, sementara protein dan kotoran lainnya dihilangkan dengan Wash Buffer. Asam nukleat mudah dielusi dengan air steril atau Elution Buffer.
Tidak seperti kit lain di pasaran, tidak ada garam chaotropic yang terkandung dalam buffer kit pemurnian plasmid kami yang telah dipatenkan. DNA yang dimurnikan adalah bebas residu resin penukar guanidin / anion.
Sistem endofree EZgeneTM menggunakan buffer yang diformulasikan secara khusus yang mengekstrak endotoksin dari lisat bakteri. Tingkat endotoksin kurang dari 0,1 EU (Endotoksin) per µg DNA plasmid.
Kit ini dirancang untuk pemurnian DNA plasmid yang cepat dan efisien dari 100 hingga 200 mL kultur E. coli. Kolom maxi memiliki kapasitas pengikatan DNA plasmid 1000 µg.
Endofree DNA yang dimurnikan siap untuk kinerja tinggi aplikasi hilir seperti transfeksi sel kuat seperti transfeksi garis sel sensitif endotoksin, sel biakan primer atau injeksi mikro.

Catatan penting

Nomor Salinan Plasmid: Hasil DNA plasmid tergantung pada asal replikasi dan ukuran plasmid. Protokol dioptimalkan untuk pemurnian plasmid nomor salinan tinggi. Untuk plasmid dengan jumlah salinan rendah, volume kultur dan volume buffer perlu ditingkatkan 2 kali. Silakan hubungi customer service kami untuk informasi lebih lanjut dan referensi Tabel 1 untuk plasmid yang umum digunakan,

Tabel 1 Plasmid yang umum digunakan dan hasil yang diharapkan.

Plasmid	Origin	Copy Numbers	Expected Yield (µg per 50 mL)
pSC101	pSC101	5	5
pACYC	P15A	10-12	5-10
pSuperCos	pMB1	10-20	10-20
pBR322	pMB1	15-20	10-20
pGEMR	Muted pMB1	300-400	100-150
pBluescriptR	ColE1	300-500	100-200
pUC	Muted pMB1	500-700	150-250

Strain Inang: Strain yang digunakan untuk menyebarkan plasmid memiliki pengaruh yang signifikan terhadap hasil. Strain inang seperti Top 10 dan DH5a menghasilkan DNA plasmid berkualitas tinggi. strain endA + seperti JM101, JM110, HB101, TG1 dan turunannya, biasanya memiliki hasil plasmid yang rendah karena endonuklease endogen atau karbohidrat tinggi yang dilepaskan selama lisis. Kami merekomendasikan untuk mengubah plasmid menjadi strain akhir jika hasil tidak memuaskan. Untuk memurnikan DNA plasmid dari strain endA + (Tabel 2), kami merekomendasikan menggunakan produk PD1712.

EndA- Strains of E. Coli

DH5α

DH1

DH21

JM106

JM109

SK2267

SRB

XLO

TOP10

DH10B

JM103

JM107

SK1590

MM294

Stbl2^TM

XL1-Blue

BJ5182

DH20

JM105

JM108

SK1592

Select96^TM

Stbl4^TM

XL10-Gold

EndA+ Strains of E. Coli

C600

JM110

RR1

ABLE® C

CJ236

KW251

P2392

BL21(DE3)

HB101

TG1

TB1

ABLE® K

DH12S^TM

LE392

PR700

BL21(DE3)

pLysS

JM101

JM83

TKB1

HMS174

ES1301

M1061

Q358

BMH 71-18

All NM strains

All Y strains

Massa Sel Optimal (OD600 x mL Kultur): Prosedur ini dirancang untuk mengisolasi plasmid yang ditumbuhkan dalam media LB standar (Luria Bertani) selama 12-16 jam hingga kepadatan OD600 2.0 hingga 3.0. Jika media kaya seperti TB atau 2xYT digunakan, pastikan kepadatan sel tidak melebihi 3.0 (OD600). Rasio biomassa yang tinggi terhadap buffer lisis menghasilkan hasil dan kemurnian DNA yang rendah. Kolom maxi memiliki biomassa optimal 500-1000. Misalnya, jika OD600 adalah 3.0, volume kultur optimal harus 100 sampai 200 mL.

Volume Kultur: Gunakan labu atau tabung dengan volume 4 kali lebih besar dari media kultur untuk memastikan kondisi optimal untuk pertumbuhan bakteri. Jangan melebihi volume kultur maksimum yang disarankan dalam protokol. Lisis yang tidak lengkap karena jumlah kultur bakteri yang berlebihan menghasilkan hasil yang lebih rendah dan kemurnian yang lebih rendah.

Penyimpanan dan Stabilitas

Buffer A1 harus disimpan pada suhu 4 ° C setelah RNase A ditambahkan dan Buffer ER harus disimpan pada suhu 4 ° C. Semua bahan lainnya dapat disimpan pada suhu kamar (22-25 ° C). Umur simpan yang dijamin adalah 12 bulan sejak tanggal pembelian.

Penting

RNaseA: Ini adalah bentuk yang stabil atau setengah hari ketika disimpan pada suhu kamar. Tampilkan RNaseAvial secara singkat. TambahkanRNaseAsolutiontoBufferA1dan campur dengan baik sebelum digunakan.Simpan pada4 ° C.
BufferB1berprecipitates di bawah suhu kamar. Diskritkritistowarmupthebufferat50 ° Cuntukmenghapusseperti yangsebelum digunakan.
BufferN3mungkin bentukprecipitatesdi bawah10 ° C, hangatupat37 ° Cuntukmenghapusresepipitatessebelum digunakan.
KeepthecaptightlyclosedforBufferB1setelah digunakan.
Memastikan ketersediaan centrifuge (13.000 rpm). Khususnya, setelah mencampurkannya dengan etanol, sampel sampel diproses segera dengan sentrifugasi.
Lakukan semua sentrifugasi pada suhu kamar.

Bahan dipasok oleh pengguna

100% etanol
Centrifuge kecepatan tinggi
50mL tabung sentrifugal berkecepatan tinggi
50mL tabung kerucut
IsopropanolifprecipitatetheplasmidDNA.