Product Description

Express Endofree Plasmid Midiprep

pengantar

Kunci kit ini adalah sistem pengikatan DNA milik kami yang memungkinkan pengikatan DNA yang sangat efisien ke matriks ezBindTM kami, sementara protein dan kotoran lainnya dihilangkan dengan Wash Buffer. Asam nukleat mudah dielusi dengan air steril atau Elution Buffer.
Tidak seperti kit lain di pasaran, tidak ada garam chaotropic yang terkandung dalam buffer kit pemurnian plasmid kami yang telah dipatenkan. DNA yang dimurnikan adalah bebas residu resin penukar guanidin / anion.
Plasmid yang diisolasi dengan protokol tradisional biasanya mengandung endotoksin tingkat tinggi (Lipopolisakarida atau LPS). Untuk transfeksi jalur sel sensitif endotoksin atau injeksi mikro, endotoksin harus dibuang sebelum aplikasi. Sistem endofree EZgeneTM menggunakan buffer yang diformulasikan secara khusus yang mengekstrak endotoksin dari DNA plasmid. Ekstraksi dua putaran akan menurunkan tingkat endotoksin menjadi 0,1 EU (Endotoksin) per µg DNA plasmid.
Kit ini dirancang untuk pemurnian DNA plasmid yang cepat dan efisien dari 15 hingga 50 mL kultur E. coli. Kolom midi memiliki kapasitas pengikatan DNA plasmid 250 µg.
Endofree DNA yang dimurnikan siap untuk kinerja tinggi aplikasi hilir seperti transfeksi jalur sel sensitif endotoksin, sel kultur primer atau injeksi mikro.

Catatan penting

Nomor Salinan Plasmid: Hasil DNA plasmid tergantung pada asal replikasi dan ukuran plasmid. Protokol dioptimalkan untuk pemurnian plasmid nomor salinan tinggi. Untuk plasmid dengan jumlah salinan rendah, volume kultur dan volume buffer perlu ditingkatkan 2 kali. Silakan hubungi customer service kami untuk informasi lebih lanjut dan referensi Tabel 1 untuk plasmid yang umum digunakan,

Tabel 1 Plasmid yang umum digunakan dan hasil yang diharapkan.

Strain Inang: Strain yang digunakan untuk menyebarkan plasmid memiliki pengaruh yang signifikan terhadap hasil. Strain inang seperti Top 10 dan DH5a menghasilkan DNA plasmid berkualitas tinggi. strain endA + seperti JM101, JM110, HB101, TG1 dan turunannya, biasanya memiliki hasil plasmid yang rendah karena endonuklease endogen atau karbohidrat tinggi yang dilepaskan selama lisis. Kami merekomendasikan untuk mengubah plasmid menjadi strain akhir jika hasil tidak memuaskan. Untuk memurnikan DNA plasmid dari strain endA + (Tabel 2), kami merekomendasikan menggunakan produk PD1712.

Before Starting

Persiapkan semua komponen dan persiapkan semua bahan yang diperlukan dengan memeriksa buklet instruksi ini dan menjadi terbiasa dengan setiap langkah.

Penting

RNaseA: Ini adalah bentuk yang stabil atau setengah hari ketika disimpan pada suhu kamar. Tampilkan RNaseAvial secara singkat. TambahkanRNaseAsolutiontoBufferA1dan campur dengan baik sebelum digunakan.Simpan pada4 ° C.
BufferB1berprecipitates di bawah suhu kamar. Diskritkritistowarmupthebufferat50 ° Cuntukmenghapusseperti yangsebelum digunakan.
BufferN3mungkin bentukprecipitatesdi bawah10 ° C, hangatupat37 ° Cuntukmenghapusresepipitatessebelum digunakan.
KeepthecaptightlyclosedforBufferB1setelah digunakan.
Memastikan ketersediaan centrifuge (13.000 rpm). Khususnya, setelah mencampurkannya dengan etanol, sampel sampel diproses segera dengan sentrifugasi.
Lakukan semua sentrifugasi pada suhu kamar.

Bahan dipasok oleh pengguna

100% etanol
Centrifuge kecepatan tinggi
50mL tabung sentrifugal berkecepatan tinggi
50mL tabung kerucut
IsopropanolifprecipitatetheplasmidDNA.