Product Description
Introduction
Kunci kit ini adalah sistem pengikatan DNA milik kami yang mengikat DNA secara eksklusif dan efisien ke matriks ezBindTM kami sementara protein dan kotoran lainnya dihilangkan dengan penyangga pencuci. Asam nukleat mudah dielusi dengan air steril atau Elution Buffer. Tidak seperti kit lain di pasaran, tidak ada garam chaotropik yang terkandung dalam buffer kit pemurnian plasmid kami yang telah dipatenkan. DNA yang dimurnikan adalah bebas residu resin penukar guanidin / anion. Plasmid yang diisolasi dengan protokol tradisional biasanya mengandung endotoksin tingkat tinggi (Lipopolisakarida atau LPS). Untuk transfeksi jalur sel sensitif endotoksin atau injeksi mikro, endotoksin harus dibuang sebelum aplikasi. Sistem endofree EZgeneTM menggunakan buffer yang diformulasikan secara khusus yang mengekstrak endotoksin dari DNA plasmid. Ekstraksi dua putaran akan menurunkan tingkat endotoksin menjadi 0,1 EU (Endotoksin) per µg DNA plasmid. Kit miniprep plasmid ujung tiga menyediakan langkah pembuangan endotoksin yang efisien ke dalam prosedur pemurnian tradisional untuk menghasilkan DNA plasmid tingkat transfeksi. Kit ini dirancang untuk pemurnian DNA plasmid yang cepat dan efisien dari 15 hingga 50 mL kultur E. coli. Kolom mini memiliki kapasitas pengikatan DNA 250 µg. Endofree DNA yang dimurnikan siap untuk aplikasi hilir seperti transfeksi jalur sel sensitif endotoksin, sel biakan primer atau injeksi mikro.
Important Notes
Nomor Salinan Plasmid: Hasil DNA plasmid tergantung pada asal replikasi dan ukuran plasmid. Protokol dioptimalkan untuk pemurnian plasmid nomor salinan tinggi. Untuk plasmid dengan jumlah salinan rendah, volume kultur dan volume buffer perlu ditingkatkan 2 kali. Silakan hubungi customer service kami untuk informasi lebih lanjut dan referensi Tabel 1 untuk plasmid yang umum digunakan,
Table 1 Commonly used plasmid.
| Plasmid |
Origin |
Copy Numbers |
Expected Yield
(µg per 50 mL)
|
| pSC101 |
pSC101 |
5
|
5
|
| pACYC |
P15A |
10-12
|
5-10
|
| pSuperCos |
pMB1 |
10-20
|
10-20
|
| pBR322 |
pMB1 |
15-20
|
10-20
|
| pGEMR |
Muted pMB1 |
300-400
|
100-150
|
| pBluescriptR |
ColE1 |
300-500
|
100-200
|
| pUC |
Muted pMB1 |
500-700
|
150-250
|
Strain Inang: Strain yang digunakan untuk menyebarkan plasmid memiliki pengaruh yang signifikan terhadap hasil. Strain inang seperti Top 10 dan DH5a menghasilkan DNA plasmid berkualitas tinggi. strain endA + seperti JM101, JM110, HB101, TG1 dan turunannya, biasanya memiliki hasil plasmid yang rendah karena endonuklease endogen atau karbohidrat tinggi yang dilepaskan selama lisis. Kami merekomendasikan untuk mengubah plasmid menjadi strain akhir jika hasil tidak memuaskan.
Table2 endA strains of E. Coli.
| EndA- Strains of E. Coli |
| DH5α |
DH1 |
DH21 |
JM106 |
JM109 |
SK2267 |
SRB |
XLO |
| TOP10 |
DH10B |
JM103 |
JM107 |
SK1590 |
MM294 |
Stbl2TM |
XL1-Blue |
| BJ5182 |
DH20 |
JM105 |
JM108 |
SK1592 |
Select96TM |
Stbl4TM |
XL10-Gold |
| EndA+ Strains of E. Coli |
| C600 |
JM110 |
RR1 |
ABLE®C |
CJ236 |
KW251 |
P2392 |
BL21(DE3) |
| HB101 |
TG1 |
TB1 |
ABLE®K |
DH12STM |
LE392 |
PR700 |
BL21(DE3)pLysS |
| JM101 |
JM83 |
TKB1 |
HMS174 |
ES1301 |
M1061 |
Q358 |
BMH 71-18 |
| All NM strains |
All Y strains |
Massa Sel Optimal (OD600 x mL Kultur): Prosedur ini dirancang untuk mengisolasi plasmid yang ditumbuhkan dalam media LB standar (Luria Bertani) selama 12 -16 jam dengan kepadatan OD600 2.0 hingga 3.0. Jika media kaya seperti TB atau 2xYT digunakan, pastikan kepadatan sel tidak melebihi 3.0 (OD600). Rasio tinggi biomassa di atas buffer lisis menghasilkan hasil dan kemurnian DNA yang rendah. Kolom midi memiliki biomassa optimal 100-150. Misalnya, jika OD600 adalah 3,0, volume kultur optimal harus 25-50 mL.
Volume Kultur: Gunakan labu atau tabung dalam voulme 4 kali lebih besar daripada media kultur untuk memastikan kondisi optimal untuk pertumbuhan bakteri. Jangan melebihi volume kultur maksimum yang disarankan dalam protokol. Lisis yang tidak lengkap karena jumlah kultur bakteri yang berlebihan menghasilkan hasil yang lebih rendah dan kemurnian yang lebih rendah.
Storage and Stability
Buffer A1 harus disimpan pada suhu 4 ° C setelah RNase A ditambahkan. Semua bahan lainnya dapat disimpan pada suhu kamar (22-25 ° C). Umur simpan yang dijamin adalah 12 bulan sejak tanggal pembelian.
Before Starting
Dua prosedur penghilangan endotoksin disediakan. Protokol A menghilangkan endotoksin selama pemurnian DNA plasmid dan Protokol B menghilangkan endotoksin setelah pemurnian DNA plasmid. Persiapkan semua komponen dan persiapkan semua bahan yang diperlukan dengan memeriksa buklet instruksi ini dan menjadi terbiasa dengan setiap langkah.
Important
RNase A: Stabil selama lebih dari setengah tahun bila disimpan pada suhu kamar. Putar botol RNase A sebentar. Tambahkan solusi RNase A ke Buffer A1 dan aduk rata sebelum digunakan. Simpan pada suhu 4 ° C. Buffer ER harus disimpan pada suhu 4 ° C. Penyangga B1 mengendap di bawah suhu kamar. Sangat penting untuk memanaskan buffer pada 50 ° C untuk melarutkan endapan sebelum digunakan. Tutup rapat untuk Buffer B1 setelah digunakan. Pastikan ketersediaan centrifuge, terlebih setelah mencampurkan lisat dengan ethanol, sampel perlu segera diolah dengan cara sentrifugasi. Lakukan semua sentrifugasi pada suhu kamar.
Materials supplied by users
- 70% ethanol and 100% ethanol.
- High speed centrifuge.
- 30 mL high speed centrifuge tubes.
- 15 mL and 50 mL conical tubes.
Kit Contents
| Catalog # |
PD1420-00
|
PD1420-01
|
PD1420-02
|
| Preps |
2
|
10
|
25
|
| EzBindTM Columns |
2
|
10
|
25
|
| Buffer A1 |
6 mL
|
30 mL
|
70 mL
|
| Buffer ER |
300 µL
|
1.5 mL
|
3.5 mL
|
| Buffer B1 |
6 mL
|
30 mL
|
70 mL
|
| Buffer D1 |
600 µL
|
3 mL
|
7 mL
|
| Buffer N3 |
3 mL
|
15 mL
|
30 mL
|
| Buffer RET |
12 mL
|
60 mL
|
135 mL
|
| Endofree Elution Buffer |
3 mL
|
15 mL
|
40 mL
|
| RNase A (20 mg/mL) |
0.6 mg
(30 µL)
|
3 mg
(150 µL)
|
7 mg
(350 µL)
|
| User Manual |
1
|
1
|
1
|
Safety Information :
Buffer N3 mengandung asam asetat, pakai sarung tangan dan kacamata pelindung saat menangani. Buffer N3 dan RET mengandung garam chaotropic, yang dapat membentuk senyawa reaktif jika digabungkan dengan pemutih. Jangan menambahkan pemutih atau larutan asam langsung ke limbah persiapan.
MORE INFO :
——————————————
Website : www.bmdstore.com
No Kantor : 021-2943 2095
No HP : 0813 1122 7684 (WA)
Email : [email protected]
