Product Description
Buffer A1, B1, C1, Elution Buffer, RNase A, Maxi columns (flat bottom) (2), User Manual(1)
Introduction
Kunci kit ini adalah sistem pengikatan DNA milik kami yang memungkinkan pengikatan DNA yang sangat efisien ke matriks ezBindTM kami sementara protein dan kotoran lainnya dihilangkan dengan penyangga pencuci. Asam nukleat mudah dielusi dengan air steril atau Elution Buffer. Tidak seperti kit lain di pasaran, kit pemurnian plasmid kami yang telah dipatenkan tidak memiliki garam chaotropic di buffernya. DNA yang dimurnikan adalah bebas residu resin penukar guanidin / anion. Kit ini dirancang untuk pemurnian DNA plasmid yang cepat dan efisien dari 100 hingga 250 mL kultur E. coli. Kolom maxi memiliki kapasitas pengikatan DNA plasmid 1 mg. DNA plasmid yang dimurnikan siap untuk aplikasi hilir seperti transfeksi sel kuat seperti HEK293, pemetaan restriksi, skrining perpustakaan, sekuensing, serta terapi gen dan vaksinasi genetik.
Important Notes
Nomor Salinan Plasmid: Hasil DNA plasmid tergantung pada asal replikasi dan ukuran plasmid. Protokol dioptimalkan untuk pemurnian plasmid nomor salinan tinggi. Untuk plasmid dengan jumlah salinan rendah, volume kultur dan volume buffer perlu ditingkatkan 2 hingga 3 kali. Tabel Referensi 1 untuk plasmid yang umum digunakan,
Table 1 Commonly used plasmids.
| Plasmid |
Origin |
Copy Numbers |
Expected Yield(µg per 200 mL) |
| PSC101 |
pSC101 |
5
|
12
|
| pACYC |
P15A |
10-12
|
25-40
|
| pSuperCos |
pMB1 |
10-20
|
30-50
|
| PBR322 |
pMB1 |
15-20
|
35-50
|
| pGEMR |
Muted pMB1 |
300-400
|
350-450
|
| pBluescriptR |
ColE1 |
300-500
|
450-600
|
| PUC |
Muted pMB1 |
500-700
|
700-1,000
|
Strain Inang: Strain yang digunakan untuk menyebarkan plasmid memiliki pengaruh yang signifikan terhadap hasil. Strain inang seperti Top 10 dan DH5a menghasilkan DNA plasmid berkualitas tinggi. strain endA + seperti JM101, JM110, HB101, TG1 dan turunannya, biasanya memiliki hasil plasmid yang rendah karena endonuklease endogen atau karbohidrat tinggi yang dilepaskan selama lisis. Kami merekomendasikan untuk mengubah plasmid menjadi strain akhir jika hasil tidak memuaskan. Untuk memurnikan DNA plasmid dari strain endA + (Tabel 2), kami merekomendasikan menggunakan produk PD1713.
Table2 endA+ strains of E. Coli.
| EndA- Strains of E. Coli |
| DH5α |
DH1 |
DH21 |
JM106 |
JM109 |
SK2267 |
SRB |
XLO |
| TOP10 |
DH10B |
JM103 |
JM107 |
SK1590 |
MM294 |
Stbl2TM |
XL1-Blue |
| BJ5182 |
DH20 |
JM105 |
JM108 |
SK1592 |
Select96TM |
Stbl4TM |
XL10-Gold |
| EndA+ Strains of E. Coli |
| C600 |
JM110 |
RR1 |
ABLE® C |
CJ236 |
KW251 |
P2392 |
BL21(DE3) |
| HB101 |
TG1 |
TB1 |
ABLE® K |
DH12STM |
LE392 |
PR700 |
BL21(DE3)pLysS |
| JM101 |
JM83 |
TKB1 |
HMS174 |
ES1301 |
M1061 |
Q358 |
BMH 71-18 |
| All NM strains |
All Y strains |
Massa Sel Optimal (OD600 x mL Kultur): Prosedur ini dirancang untuk mengisolasi plasmid yang ditumbuhkan dalam media LB standar (Luria Bertani) selama 12 -16 jam dengan kepadatan OD600 2.0 hingga 3.0. Jika media kaya seperti TB atau 2xYT digunakan, pastikan kepadatan sel tidak melebihi 3.0 (OD600). Rasio tinggi biomassa di atas buffer lisis menghasilkan hasil dan kemurnian DNA yang rendah. Kolom maxi memiliki biomassa optimal 450-550. Misalnya, jika OD600 adalah 2,5, volume kultur optimal harus 200 mL. Volume Kultur: Gunakan labu atau tabung dengan volume 4 kali lebih besar dari media kultur untuk memastikan kondisi optimal untuk pertumbuhan bakteri. Jangan melebihi volume kultur maksimum yang disarankan dalam protokol. Lisis yang tidak lengkap karena jumlah kultur bakteri yang berlebihan menghasilkan hasil yang lebih rendah dan kemurnian yang lebih rendah.
Storage and Stability
Buffer A1 harus disimpan pada suhu 4 ° C setelah RNase A ditambahkan. Semua bahan lainnya dapat disimpan pada suhu kamar (22-25 ° C). Umur simpan yang dijamin adalah 12 bulan sejak tanggal pembelian.
Before Starting
Persiapkan semua komponen dan persiapkan semua bahan yang diperlukan dengan memeriksa buklet instruksi ini dan menjadi terbiasa dengan setiap langkah.
Important
RNase A: Stabil selama lebih dari setengah tahun bila disimpan pada suhu kamar. Putar botol RNase A sebentar. Tambahkan larutan RNase A ke Buffer A1 dan aduk rata sebelum digunakan, lalu simpan pada suhu 4oC.
Buffer B1 mengendap di bawah suhu kamar. Sangat penting untuk memanaskan buffer pada 50oC untuk melarutkan endapan sebelum digunakan.
Menginkubasi Buffer C1 pada suhu 4 oC sebelum dilakukan percobaan akan menurunkan endapan mengambang.
Tutup rapat untuk Buffer B1 setelah digunakan.
Pastikan ketersediaan centrifuge dan vacuum manifold, terutama setelah mencampurkan lisat dengan ethanol maka sampel perlu segera diolah baik dengan cara sentrifugasi maupun vakum.
Lakukan semua sentrifugasi pada suhu ruangan.
Materials supplied by users
- 70% ethanol and 100% ethanol
- High speed centrifuge
- 30 mL high speed centrifuge tubes
- 50 mL tubes
Kit contents
| Catalog# |
PD1511-00
|
PD1511-01
|
PD1511-02
|
| Preps |
2
|
10
|
25
|
| ezBindTM Columns |
2
|
10
|
25
|
| Buffer A1 |
22 mL
|
110 mL
|
270 mL
|
| Buffer B1 |
22 mL
|
110 mL
|
270 mL
|
| Buffer C1 |
27 mL
|
135 mL
|
330 mL
|
| RNase A(20 mg/mL) |
2.2 mg(110 µL)
|
11 mg(550 µL)
|
27 mg(1.35 µL)
|
| Elution Buffer |
6 mL
|
30 mL
|
60 mL
|
| User Manual |
1
|
1
|
1
|
Safety Information
Buffer C1 mengandung asam asam, pakai sarung tangan dan kacamata pelindung saat menangani.
Buffer C1 mengandung garam chaotropic, yang dapat membentuk senyawa reaktif jika digabungkan dengan pemutih. Jangan menambahkan pemutih atau larutan asam langsung ke limbah persiapan.
Operating Protocol
MORE INFO :
——————————————
Website : www.bmdstore.com
No Kantor : 021-2943 2095
No HP : 0813 1754 7882
Email : [email protected]
